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货号:Cat. No.:MD101-1    Size:100ul X 20支

——产品介绍

       SM-DH5α Competent Cell 是华麦生物研发的用特殊化学方制备的DH5α感受态细胞,相比于常规方法制备的感受态细胞,其转化不需要冰浴、热激和孵育等步骤,最快能在30秒内完成转化步骤。转化步骤多样性,可以实现30秒,5分钟及传统步骤的转化,效率可达108-109菌落数/ug质粒(pUC19),是实现DNA克隆,文库构建等实验的理想产品。

——产品特色

Ø1、 转化快:最快30秒快速转化,不需冰浴、热激和孵育步骤。

Ø2、 效率高:可达到108-109cfu/ug pUC19 DNA。

Ø3、 稳定性好:-70度冰箱可保存一年时间。

SM-DH5a基因型

F-φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96relA1

——操作步骤

1)30秒快速转化

1. 取100ul冰浴上融化的SM-DH5α感受态细胞,加入目的DNA(质粒或者连接产物),轻轻混匀。

2. 向每个离心管中加入200ul无菌的SOC或者LB培养基(不含抗生素),轻柔地混匀。

3. 吸取已转化的感受态细胞加到含氨苄抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被稀释,平板

    倒置,过夜培养。

注意30秒快速转化的产物是携带氨苄抗性的质粒;其他抗性的质粒,开始步骤一致,但加入SOC或LB培养基后,需在

     37℃,200 rmp的摇床上至少孵育30分钟,然后再涂板。

2)5分钟转化

1. 取100ul冰浴上融化的SM-DH5α感受态细胞,加入目的DNA(质粒或者连接产物),轻轻混匀,在冰浴中静置2分钟。

2.  42℃水浴中热激30秒,然后快速将离心管转移至冰浴中2分钟,该过程不要振荡离心管。

3. 向每个离心管中加入200ul无菌的SOC或者LB培养基(不含抗生素),轻柔地混匀。

4. 吸取已转化的感受态细胞加到含氨苄抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被稀释,平板倒置,过夜培养。

注意:5分钟快速转化的产物是携带氨苄抗性的质粒;其他抗性的质粒,开始步骤一致,但加入SOC或LB培养基后,需在37℃,200 rmp的摇床上至少孵育30分钟,然后再涂板。

3)传统转化步骤

1. 取100ul冰浴上融化的SM-DH5α感受态细胞,加入目的DNA(质粒或者连接产物),轻轻混匀,在冰浴中静置30分钟。

2. 42℃水浴中热激30秒,然后快速将离心管转移至冰浴中2分钟,该过程不要振荡离心管。

3. 向每个离心管中加入900ul无菌的SOC或者LB培养基(不含抗生素),轻柔地混匀后置于37℃,200rpm摇床上孵育1小时,使细菌复苏。

4. 根据实验要求,吸取不同体积或者离心浓缩后的已转化的感受态细胞加入含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开,将平板置于37℃至液体被稀释,平板倒置,过夜培养。

转化示意图转化迅速,最快30秒即可完成转化

 

———保存条件

        -70℃保存,干冰运输,至少1年有效。

——注意事项

1. 刚化冻的感受态细胞效率最高,避免反复冻融;

2. 30秒或5分钟快速转化的产物是携带氨苄抗性的;其他抗性要加入SOB或者LB培养基,在37℃,200rmp摇床上至少孵育30分钟;

3. 转化整个过程要轻柔,避免移液器吹吸。