点击关闭

【返回列表页】

货号:M10060  E.coli Washing Buffer  45ml
/E.coli Competent Buffer 15ml
货号:M10200  E.coli Washing Buffer 150ml
/ E.coli Competent Buffer 50ml
——产品介绍
       SM-Speed E.coli Transformation Kit® 是华麦生物研发的可实现快速转化的感受态细胞制备试剂盒,适用于实验室多种菌株,特别是 DH5α, JM109, DH10B, XL1-Blue 等。特殊的感受态试剂配方,使转化效率可达到108-5X109cfu/ug pUC19 DNA,转化整个过程不需冰浴、热激和孵育等步骤,最快30秒即可实现完美的转化。
 ——产品特色
Ø1、 转化快:最快可30快速转化,不需冰浴、热激和孵育步骤。
Ø2、 效率高:达到108-5X109cfu/ug pUC19 DNA。
Ø3、 稳定性好:-70℃冰箱可保存一年时间。
Ø4、 安全性高:不需液氮处理,直接超低温冻存即可。
——操作步骤
        以50ml的E.coli培养体积为例
—— 感受态细胞制备操作步骤
1. 将0.5ml新鲜过夜培养的E.coli菌接种于50ml SOB培养基中(1:100比例接种),在摇床中以25℃,250 rpm条件下振荡培
    养,直至OD600nm达到0.4-0.6。
★注意:在25℃,250 rpm振荡培养可提高感受态细胞的效率;制备感受态的E.coli菌株应处于生长的对数期,即OD600nm
  达到0.4-0.6,大于0.6时的细菌状态变差,小于0.4时细菌量较少,均不适合制备感受态细胞。
2.将第一步中的E.coli培养基转移至冰上,冰浴10分钟预冷细菌。然后在4℃条件下,3000rpm离心10分钟。
★注意:制备感受态细胞时所有步骤都要在低温条件下进行,操作时动作要轻柔,不可剧烈地处理E.coli菌体。
3. 弃去离心后的上清,加入15ml E.coli Washing Buffer,轻柔地重悬细菌沉淀;重复实验步骤2的操作。
4. 彻底地弃去上清,加入5ml E.coli Competent Buffer,轻柔地重悬细菌沉淀。
5. 在冰上以100ul或200ul的体积分装E.coli的悬浮液,直接冻存感受态细胞至-70℃超低温冰箱中(勿用液氮处理感受态细胞)。
 
图示1:感受态细胞制备流程图
 
——转化步骤
       多种转化形式可选:30秒极速转化;5分钟快速转化;常规转化
图示2:转化流程图
 
 ———保存条件
         低温运输,4℃保存,有效期12月。
——注意事项
1. E.coli菌株影响感受态效率
     不同的菌株制备的感受效率差异不同,像DH5α,JM109, DH10B,XL1-Blue ,XL10 Gold, TG1等菌株,使用SM-Speed E.coli Transformation Kit制备的感受态效率较高。
2. 菌株培养条件
      菌株培养时,用营养更丰富的SOB培养基;在25℃,250rpm振荡培养,会使E.coli菌处于最佳生长状态,更适宜用于制备感受态细胞。
3. 预热平板可提高转化效率
      在转化前,将4℃保存的平板转移到37℃培养箱中预热一段时间,可提高转化时的效率。
4. 转化时加入SOC培养基
      在做转化实验时,加入营养丰富的SOC培养基至DNA-感受态转化混合液中,增强感受态细胞的生长及吸收DNA的能力。
附录:
SOB培养基配制
1. 组份浓度:2%(W/V)Tryptone;0.5%(W/V)Yeast Extract;0.05%(W/V)NaCl;2.5 mM  KCl;10 mM MgCl2
2. 配制方法:
①、配制250 mM KCl溶解:在90 ml的去离子水中溶解1.86 g KCl后,定容至100 ml。
②、配制2 M MgCl2溶液:在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl2后,定容至100 ml,高温高压灭菌。
③、称取下列试剂,置于1 L烧杯中:Tryptone 20g;Yeast Extract 5g;NaCl 0.5 g。
④、加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
⑤、量取10 ml 250 mM KCl溶解,加入到烧杯中。
⑥、滴加5 N NaOH(约0.2 ml),调节pH值至7.0。
⑦、加去离子水将培养基定容至1 L。
SOC培养基配制
1. 配制1M葡萄糖溶液:在90ml去离子水中溶解18g葡萄糖,充分溶解后定容至100ml,用0.22um滤器过滤除菌。
2. 向100ml SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2ml,均匀混合。